Esferocitosis hereditaria: experiencia clínica y diagnóstica en Argentina / Hereditary spherocytosis: clinical and diagnostic experience in Argentina / Esferocitose hereditária: experiência clínica e diagnóstica na Argentina

Los objetivos del presente estudio fueron: a) Analizar las características demográficas y clínicas de nuestra población al diagnóstico; b) Evaluar si las pruebas más recientes presentan ventajas sobre las tradicionales; c) Confirmar la frecuencia de las distintas deficiencias de proteínas de membrana; d) Establecer la relación entre severidad y resultado de las pruebas o tipo de deficiencia. Se analizaron 359 individuos estudiados desde 2007, cuando se incorporaron criohemólisis hipertónica (CH), citometría de flujo con eosina-5'- maleimida (5'EMA-CF), FOE por citometría de flujo (FOE-CF) y electroforesis de proteínas de membrana (SDS-PAGE) al estudio de laboratorio clásico, fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) y autohemólisis (AH). Criterios diagnósticos para Esferocitosis Hereditaria (ESH): esferocitos en frotis y dos pruebas positivas. Se identificaron 174 pacientes con ESH y 22 portadores sanos. El 74,9% eran menores de 12 años. La transmisión fue dominante en el 83,1% de los casos. Tuvieron manifestaciones neonatales 89,1%. Las pruebas con mayor sensibilidad fueron CH (92,0%), FOE diferida (91,1%) y 5'EMA-CF (88,5%). En los 125 pacientes en quienes se realizaron CH, 5'EMA-CF y FOE-CF se observó que todos tenían al menos una prueba positiva; 122 (97,6%) tuvieron dos o tres positivas. Las deficiencias más frecuentes fueron ankirina y espectrina. No hubo diferencia en el resultado de las pruebas entre los subgrupos de severidad. Se concluye que las deficiencias más frecuentes en Argentina son ankirina y espectrina, coincidiendo con otras poblaciones latinoamericanas. El uso simultáneo de CH, 5'EMA-CF y FOE-CF permite diagnosticar más del 97% de los casos. La incidencia de manifestaciones neonatales es elevada.

The aims of this study were (a) to assess demographic and clinical aspects of our population at diagnosis; (b) to evaluate diagnostic accuracy of hypertonic cryohemolysis (HC), eosin-5'-maleimide flow cytometry (EMA-FC) and flow cytometric osmotic fragility (OF-FC) in relation to standard screening tests osmotic fragility (OF) and autohemolysis (AH); (c) to confirm the previously reported prevalence of membrane proteins defects; and (d) to assess the relationship between severity of anemia and results of confirmatory tests. Since 2007, the following tests were available in our laboratory: OF, AH, HC, EMA-FC, OF-FC and SDS-PAGE of membrane proteins. Diagnostic criteria for hereditary spherocytosis were spherocytes in blood smear plus ≥2 positive tests. Data from 359 individuals were analyzed: 174 HS patients and 22 silent carriers were detected; 74.9% of patients were less than 12 years old; 83.1% of them showed a dominant inheritance pattern; antecedent of neonatal jaundice/anemia was registered in 89.1%. Tests with higher sensitivity were: HC (92.0%), incubated OF (91.1%), and EMA-FC (88.5%). HC, EMA-FC and OF-FC were simultaneously performed on 125 patients: each of them had at least 1 positive test; 122 (97.6%) had 2 or 3 positive tests. Ankyrin and spectrin were the most frequently found protein deficiencies. Comparison of test results in relation to severity of anemia showed no difference between groups. It can be concluded that compared toother Latin American countries, ankyrin and spectrin were the most frequent protein deficiencies. Simultaneous performing of HC, EMA-FC and OF-FC enabled diagnosing HS in more than 97% of patients. A high incidence of neonatal jaundice/anemia was observed.

Os objetivos do presente estudo foram: a) analisar as características demográficas e clínicas de nossa população ao diagnóstico; b) Avaliar se as provas mais recentes apresentam vantagens sobre as tradicionais; c) Confirmar a frequência das diversas deficiências de proteínas de membrana; d) Establecer a relação entre severidade e resultado das provas ou tipo de deficiência. Foram analisados 359 indivíduos estudados desde 2007, quando se incorporaram crio-hemólise hipertônica (CH), citometria de fluxo com eosina-5'-maleimida (5'EMA-CF), FOE por citometria de fluxo (FOE-CF) e eletroforese de proteínas de membrana (SDS-PAGE) ao estudo de laboratório clássico - fragilidade osmótica eritrocitária (FOE) e auto-hemólise (AH). Critérios diagnósticos para ESH: esferócitos em esfregaço e duas provas positivas. Foram identificados 174 pacientes com ESH e 22 portadores sadios. 74,9% eram menores de 12 anos. A transmissão foi dominante em 83,1%. Tiveram manifestações neonatais 89,1%. As provas com maior sensibilidade foram CH (92,0%), FOE diferida (91,1%) e 5'EMA-CF (88,5%). Nos 125 pacientes aos quais lhes realizaram CH, 5'EMA-CF e FOE-CF se observou que todos tinham no mínimo uma prova positiva; 122 (97,6%) tiveram duas ou três positivas. As deficiências mais frequentes foram anquirina e espectrina. Não houve diferença no resultado das provas entre os subgrupos de severidade. Conclui-se que as deficiências mais frequentes na Argentina são anquirina e espectrina, as quais coincidem com outras populações latinoamericanas. O uso simultâneo de CH, 5'EMA-CF e FOE-CF permite diagnosticar mais de 97% dos casos. A incidência de manifestações neonatais é elevada.

Eritropoyetina como agente eritropoyético y no eritropoyético: consideraciones terapéuticas / Erythropoietic and non-erythropoietic functions of erythropoietin: therapeutic considerations / Eritropoietina como agente eritropoiético e não eritropoiético: considerações terapêuticas / Erythropoietic and non-erythropoietic functions of erythropoietin: therapeutic considerations

La producción de glóbulos rojos es controlada continuamente para suplir la desaparición de las células envejecidas y garantizar un aporte de oxígeno adecuado a todo el organismo. La citoquina pleitrópica eritropoyetina (Epo), originalmente definida por su rol en la eritropoyesis para prevenir la muerte programada de progenitores eritroides en la médula ósea, ha demostrado un rol antiapoptótico protector sobre diversos tejidos no hematopoyéticos. A la reconocida eficacia del tratamiento con eritropoyetina recombinante humana (rhuEpo) para contrarrestar la anemia que acompaña a patologías muy diversas, se agregan algunos aspectos que impiden lograr los resultados terapéuticos esperados, ya sea por resistencia al tratamiento o por el desarrollo de efectos adversos. Con el fin de prevenir estos efectos, así como reducir las dosis de rhuEpo en tratamientos crónicos se han desarrollado nuevos agentes que presentan modificaciones estructurales de la Epo, o bien alteraciones en las propiedades/actividad de la Epo nativa. Dado que, actualmente, los resultados sobre los efectos de la Epo sobre morbilidad/ mortalidad en diversas patologías no están suficientemente claros, nuevas investigaciones serán útiles para resolver dudas sobre la efectividad de la eritropoyetina y sus derivados o agentes alternativos con el fin de proveer bases sólidas para el desarrollo de ensayos clínicos concluyentes.

Erythropoietin (Epo), the cytokine required for promoting erythropoiesis through the proliferation and differentiation of erythroid cells, has been reported to act as a pleiotropic cytokine beyond the hematopoietic system. In contrast with the potentially beneficial effects attributed to recombinant human erythropoietin (rhuEpo), research has advanced to indicate that mortality and morbidity rates are increased in some patient groups when treated with rhuEpo. Some cardiac and systemic conditions may predispose to adverse events, and other factors, such as proinflammatory agents, may lead to resistance to erythropoietin treatment. Many compounds are currently under investigation in order to avoid these unwanted effects and to reduce the rhuEpo dose during chronic therapies. They are either erythropoiesis-stimulating agents different from erythropoietin or structurally modified erythropoietins with altered properties and activities. In recent reports, contrasting data have raised several concerns regarding the effectiveness of erythropoietin treatment to prevent adverse events. Therefore, much investigation is needed to provide a solid basis for the development of conclusive clinical trials.

A produção de glóbulos vermelhos é controlada continuamente para suprir o desaparecimento das células envelhecidas e garantir uma contribuição de oxigênio adequado a todo o organismo. A citocina pleiotrópica eritropoietina (Epo), originalmente definida por seu papel na eritropoiese para prevenir a morte programada de progenitores eritroides na medula óssea, tem demonstrado um papel anti-apoptótico protetor sobre diversos tecidos não hematopoiéticos. Adicionam-se à reconhecida eficácia do tratamento com eritropoietina recombinante humana (rhuEpo), para contra-arrestar a anemia que acompanha patologias muito diversas, alguns aspectos que impedem alcançar os resultados terapêuticos esperados, quer seja por resistência ao tratamento ou pelo desenvolvimento de efeitos adversos. Com o fim de prevenir estes efeitos, bem como reduzir as doses de rhuEpo em tratamentos crônicos foram desenvolvidos novos agentes que apresentam modificações estruturais da Epo, ou então alterações nas propriedades/atividade da Epo nativa. Devido a que, atualmente, os resultados sobre os efeitos da Epo sobre morbidade/mortalidade em diversas patologias não estão suficientemente claros, novas pesquisas serão úteis para resolver dúvidas sobre a efetividade da eritropoietina e seus derivados ou agentes alternativos visando a fornecer bases sólidas para o desenvolvimento de ensaios clínicos concludentes.

Diagnóstico de polineuropatía amiloidótica familiar tipo I en la Argentina / Diagnosis of familial amyloid polyneuropathy type I in Argentina

La polineuropatía amiloidótica familiar (PAF) es un tipo de amiloidosis hereditaria. Constituye un desorden autosómico dominante caracterizado por el depósito sistémico de material amiloide en tejidos especialmente en nervios periféricos. El principal componente del amiloide es una variante mutada de la transtiretina (TTR), proteína transportadora de tiroxina y retinol. Han sido descriptas numerosas mutaciones en el gen TTR que causan alteración de la secuencia primaria de la proteína. La PAF portuguesa o PAF Tipo I se origina por la variante TTR Val30Met en la cual una valina en posición 30 es reemplazada por una metionina. Es fundamental la identificación temprana de portadores de la mutación porque una vez declarada la enfermedad el único tratamiento efectivo es el trasplante hepático, órgano de síntesis de la TTR. La PAF Tipo I ha sido muy estudiada en la Argentina debido al hallazgo de un área endémica donde habitan familias descendientes de inmigrantes portugueses. El presente trabajo ha sido enfocado a resolver la necesidad diagnóstica de la comunidad, ya que la ausencia de una metodología apropiada en nuestro país ha impedido, hasta ahora, que individuos con antecedentes familiares de PAF puedan tener un diagnóstico precoz y acceder al trasplante hepático temprano. En consecuencia, nuestro objetivo fue optimizar una metodología para detectar la mutación Val30Met adaptando técnicas previamente descriptas. La fiabilidad, sencillez y rapidez en la obtención de los resultados, así como el requerimiento de pequeño volumen de muestra, hacen que la técnica desarrollada en este trabajo sea una herramienta apropiada para procedimientos de screening, permitiendo contar con un marcador preclínico de la enfermedad.

Familial amyloid polyneuro- pathy (FAP) is an autosomal dominant inherited disease, characterized by systemic deposition of amyloid fibrils in various tissues, especially in peripheral nerves, being a variant of transthyretin (TTR) the principal component of amyloid fibrils. TTR is a normal plasma protein (previously called prealbumin) that functions as a transport protein binding tiroxine and retinol. Among many mutations that have been found in the TTR gene, the variant with a single amino acid substitution of methionine for valine at position 30 (TTR Val30Met) is the responsible of the Portuguese-type Familial Amyloidotic Polyneuropathy (FAP Type I). Interest in this pathology has arisen in Argentina because of the finding of an endemic area where a group of Portuguese immigrant families is localized. Since liver transplantation is a widely accepted treatment because it results in the disappearance of variant transthyretin from plasma, an early detection of the altered gene is essential. Thus, the objective of the present work was to optimize a methodology to detect the Val30Met mutation introducing modifications into techniques that were previously developed. The simple method here described is useful to confirm the diagnosis of the potential disease and, therefore, make it possible for patients to gain access to early liver transplantation.

Toxicidad del aluminio sobre el sistema eritropoyético: mecanismos involucrados / Aluminum toxicity in erythropoiesis: related mechanisms

En la presente revisión se expone una discusión de resultados publicados que involucran al aluminio como uno de los factores que pueden afectar al sistema eritropoyético. En células K562 se determinó que el receptor específico para transferrina presente en la membrana de células eritroides posee afinidad similar para esa proteína cuando transporta hierro o aluminio y que la captación celular de hierro disminuye por la presencia de aluminio. Este metal provoca, en células eritroides, una disminución de la síntesis de hemoglobina. En base a los resultados obtenidos en estudios experimentales in vitro e in vivo se postulan dos hipótesis que involucran: la interferencia del aluminio con la captación y/o utilización celular de hierro y la interacción del aluminio con componentes de la membrana celular. Este último hecho afectaría no sólo la estructura de la membrana sino también sus características fisicoquímicas y/o sus funciones, como la unión de ligandos a sus receptores específicos de la superficie de la membrana celular. Los mecanismos que se discuten permiten adjudicar a la presencia de aluminio en el organismo tanto la inhibición del crecimiento y/o la diferenciación de células progenitoras eritroides como las diferentes alteraciones morfológicas de eritrocitos maduros

Investigación de péptidos plasmáticos en la insuficiencia renal crónica / Investigation of plasma peptides in chronic renal failure

Se describe una metodología para el fraccionamiento de péptidos y se aplica, en el presente trabajo, al análisis de compuestos péptidos presentes en el plasma de pacientes con insuficiencia renal crónica (IRC). Las muestras de plasma de sujetos controles (C;n=5) y de pacientes con IRC (n-10) fueron ultrafiltradas a través de membranas Diaflo PM 30 e YM 02, obteniéndose 2 fracciones, fracción A con sustancias de masa molecular relativa (M) menor de 1.000 y fracción B con M, aproximada entre 1.000 y 30.000, aunque los ensayos de estandarización mostraron que esta última fracción incluía proteínas de M, semejante a la albúmina. Las fracciones A, estudiadas mediante cromatografía en capa fina, mostraron la presencia de una banda fluorescamina positiva en las muestras de IRC, ausente en las C. Las fracciones B fueron analizadas por electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE) y tranferencia con detección inmunológica. Para desarrollar esta última técnica, se obtuvo un antisuero en conejo contra la fracción plasmática B, obtenida a partir de un pool de plasmas de pacientes con IRC. Después de la separación en SDS-PAGE, los compuestos fueron transferidos a papel de nitrocelulosa y detectados mediante una técnica de doble antisuero, empleando como primer antisuero, el anti-fracción IRC obtenido en conejo y luego, un antisuero inti-IgG de conejo, marcado con peroxidasa. Para el revelado final se utilizó una reacción colorimétrica, mediada por peroxidasa. El análisis de SDS-PAGE mostró que las fracciones plasmáticas B de pacientes con IRC contenían mayor número de bandas en el rango de M, 15.000-70.000 que las C, aumentando las diferencias cuali y/o cuantitativas entre los dos grupos, al emplear la técnica de separación electroforética, tranferencia de detección inmunológica. El procedimiento descrito constituye una metodología apropiada para el estudio de péptidos en líquidos biológicos

Diferenciación de proteinurias mediante electroforesis en gel de poliacrilamida / Differentation of proteinurias interceding polyacrylamide gel electrophoresis

El análisis de la distribución de las proteínas urinarias de acuerdo con sus masas moleculares relativas, constituye una información valiosa para el diagnóstico de enfermedades renales y extrarrenales. Se detalla el fraccionamiento de las proteínas presentes en muestras de orina de 24 h, sin concentrar. Se utiliza la técnica de electroforesis vertical en geles de policrilamida 10% con dodecil-sulfato de sodio (SDS-PAGE). El desarrollo electroforético se realiza entre 25 y 50 mA (V max = 200 V), durante 4-5 h,revelando con azul brillante de Coomassie R-250. Los perfiles proteicos obtenidos permiten diferenciar proteinurias tubulares, glomerulares y mixtas con distintos grados de selectividad y proteinurias extrarrenales. La buena resolución y sensibilidad de la técnica permite analizar muestras sin concentrar (concepción proteica > 0,3 g/l) y resulta adecuada para una correcta caracterización de proteinurias.

Estandarización de un método analítico: aplicación a la determinación de glicosaminoaglicanos urinarios / Standardization of a analytical method: aplication to the determination of urinary glycosaminoglycans

Se presenta la estandarización de un método para la determinación cuantitativa de glicosaminoglicanos (GAGs) urinarios, empleando una combinación de los métodos descriptos por Di Ferrante y Bitter y Muir, con algunas modificaciones que debieron ser introducidas para adecuarlo a nuestras condiciones experimentales. La determinación se basa en la precipitación de los GAGs por acción de bromuro de cetiltrimetilamonio, seguida de la hidrólisis del polímero y la posterior reacción colorimétrica con carbazol de los ácidos hexurónicos liberados. Se describen, detalladamente, los estudios de estandarización: determinación de la precisión de las distintas etapas del método, linealidad y carta de control de las pendientes de las curvas de calibración, ensayos de recuperación, investigación de interferencias y variaciones en las condiciones de trabajo. Esta metodología puede servir de base para establecer protocolos de control de cualquier procedimiento analítico